胸膜肺炎放线杆菌ApxIA毒素蛋白免疫原性分析

为鉴定胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleuropneumoniae，APP）ApxIA毒素蛋白N端疏水区和C端Ca^2＋结合区的免疫原性，参照apxIA基因序列（D16582）设计4条引物，用于扩增APP血清10型参考菌株（D13039）基因组DNA中长约3．2kb的apxIA基因及其N端（1．4kb）和C端（1．8kb）基因片段，经克隆测序后分别插入原核表达载体pET-32a中进行表达，表达的融合蛋白大小分别约为125Ku、65Ku和80Ku。表达产物免疫小鼠后的攻毒保护试验结果显示，ApxIA表达蛋白对APP血清10型（D13039）攻毒可提供完全保护，而对APP血清1型（4074）攻毒仅能提供部分保护，与提纯的Apx1毒素蛋白免疫保护效果相当；ApxIA-N端表达蛋白免疫保护活性显著高于ApxIA-C端表达蛋白，提示ApxIA蛋白免疫活性位点多位于N端，在Apx1毒素蛋白的保护性抗原活性中发挥更重要作用。     

马γ-干扰素成熟蛋白基因在大肠埃希氏茵中表达及其多克隆抗体制备

采用RT-PCR从ConA刺激的马外周血单核细胞（PBMC）中扩增获得含信号肽的马γ-干扰素（Equine interferon-γ，EIFN-γ）基因，将其克隆至载体pCR2．1-TOPO中。通过PCR方法从重组质粒（pCR-EIFN-γ）中扩增马干扰素成熟蛋白（MatureEIFN-γ，mEIFN-γ）基因，并将其亚克隆至原核表达载体pET-28a（＋）。重组子经测序鉴定正确后转化至大肠杆菌BL21（DE3），经IPTG诱导，对其产物进行SDS-PAGE分析和Western blot鉴定，将纯化后的表达产物免疫新西兰白兔制备多克隆抗体。结果表明，mEIFN-γ基因全长为441b口，含一个开放阅读框，编码146个氨基酸的成熟蛋白；对其表达产物以可溶性和包涵体两种形式存在，重组蛋白相对分子量约为18Ku，且具有免疫反应活性。mEIFN-γ基因在大肠杆菌中高效表达并在非变性和变性条件下，采用Ni^＋亲和层析纯化方法均可获得高纯度的重组马γ-干扰素制备的多克隆抗体，为建立马γ-干扰素检测方法、监测机体免疫状态和研究机体免疫机制奠定了基础。     

哺乳动物嵌合体制作及分析进展

嵌合体技术对研究哺乳动物早期胚胎的发育,探索细胞分化规律,掌握基因的表达调控规律,建立遗传疾病动物模型等具有重要意义。本文分别就近几年来嵌合体动物的制作方法及分析手段作一简要概述。     

鸡IGF-Ⅰ基因SNPs及其对屠体性状的遗传效应分析

以180只3个品系的温岭草鸡为材料,采用PCR-RFLP方法测定了IGF-Ⅰ基因的3个SNPs座位,同时分析了它们对屠体性状的遗传效应.结果显示PstⅠ、HinfⅠ和TaqⅠ识别座位分别发生T→C、C→A和C→T突变,每个SNPs座位各出现了3种基因型,其中A系在3个座位上均处于Hardy-Weinberg平衡状态(P＞0.05).方差分析显示每个座位基因型对部分屠体性状都有极显著或显著的差异(P≤0.01或0.01＜P≤0.05).多重比较显示在其中6个屠体性状上,每个座位3种基因型的最小二乘均值之间均有突变型＞杂合型＞野生型的关系,联合基因型QF/QF和QE/QF的最小二乘均值在4个屠体性状上显著高于(0.01＜P≤0.05)联合基因型PE/QE,每个座位突变等位基因都对部分屠体性状具有增效作用.A系和B系之间的遗传距离为0.005 3,聚类分析表明两系同为1枝.     

纤维素复合酶对羔羊消化道组织结构的影响

为了探明纤维素复合酶提高羔羊饲料消化率的消化道组织学基础,选择刚出生且体重相近的波尔山羊公羔30只(20日龄开始自由采食优质苜蓿干草, 80日龄断奶)分为对照组和试验组(添加0.2%酶制剂),分别在2、3和4月龄每组各选体重相近的3只羔羊屠宰.结果表明,瘤胃乳头长度、宽度和单位面积瘤胃乳头表面积随月龄增加而增加,而单位面积乳头数随着月龄的增加而减少(P ＜ 0.01).酶制剂提高3、4月龄羔羊瘤胃乳头长度(P ＜ 0.01)、宽度(P ＞ 0.05)和单位面积瘤胃乳头表面积(P ＜ 0.01),减少单位面积乳头数(P ＜ 0.01).显著提高3月龄十二指肠肠绒毛的长度(P ＜ 0.05).在3、4月龄,酶制剂有增加小肠隐窝深度和黏膜厚度的趋势,但未达到显著水平(P ＞ 0.05).     

生长激素基因多态性与生产性能关系的最新研究

生长激素是一种具有广泛生理功能的蛋白肽激素,尤其对动物的生长发育具有重要作用。研究GH基因功能区的突变对其蛋白功能的影响,以及对哺乳动物生长发育的影响,具有重要的理论意义和实践意义。因此在生产中探讨GH基因多态性与生产性能的关系,从而达到提高动物生产水平的目的,成为人们关注的重要课题。     

羔羊消化器官的早期生长发育和瘤胃内主要消化酶活性的变化

选用健康无病的波尔山羊30只,饲养在相同条件下,分别于20日龄和60日龄,各选取体重相近的3只羔羊屠宰,研究羔羊消化器官的生长发育和瘤胃内主要消化酶活性的变化规律。结果表明:两个日龄之间,消化道各部位的重量差异显著(P<0.05);复胃或瘤胃重量占体重的比例差异极显著(P<0.01),小肠或大肠的重量占体重的比例差异显著(P<0.05);瘤胃、十二指肠、盲肠中的pH60日龄显著(P<0.05)高于20日龄;回肠pH60日龄高于20日龄,但差异不显著(P>0.05);皱胃pH60日龄低于20日龄;瘤胃液中淀粉酶和木聚糖酶的活性增长迅速,60日龄显著(P<0.05)高于20日龄,而纤维素酶和果胶酶虽有一定程度的增长,但差异不显著(P>0.05)。     

胚胎干细胞的研究进展

胚胎干细胞来源于附植前胚胎的内细胞团或附植后胎儿的原始生殖细胞具有发育全能性的细胞。本文从它的研究概况、生物学特性、胚胎干细胞的分离培养与建系等方面做一概述。     

党参和白术对脾虚北京鸭肠道CCK、VIP、SSmRNA表达的影响

采用利血平建立北京鸭脾虚模型,观察健脾益气中药党参和白术对脾虚北京鸭十二指肠和空肠CCK、VIP、SSmRNA表达的影响。结果表明:脾虚组鸭十二指肠和空肠CCK、SSmRNA表达都显著(P<0.05、P<0.01)低于正常组;党参预防组、治疗Ⅱ组以及白术治疗Ⅱ组治疗效果均显著,可使十二指肠和空肠CCK、SSmRNA表达回复到正常水平。说明党参具有预防脾虚的作用,且单独高剂量(中药浓度2g/mL)使用党参和白术能达到治疗脾虚的目的,其作用机理是通过调节胃肠激素在体内的平衡达到治疗脾虚泄泻的目的。     

传染性法氏囊病病毒JS株VP2基因真核表达载体的构建及其应用

应用RT-PCR方法从鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)JS株中扩增出VP2基因,并克隆入T-easy载体。序列测定分析结果表明IBDVJS株的VP2基因与国际标准强毒株的核苷酸序列同源性达98%,氨基酸序列同源性达99%以上。随后将VP2基因克隆入真核表达载体pcDNA3.1/zeo( ),构建成功真核表达质粒pcD-VP2,pcD-VP2体外转染COS-1细胞,能在COS-1细胞中表达。利用pcD-VP2质粒进行动物实验,结果表明雏鸡免疫14d后在体内可检测到特异性抗体,pcD-VP2的真核表达质粒二次免疫诱导鸡产生对IBDV强毒攻击的保护率为67%,这一结果提示VP2基因具有重要开发应用价值。